关于qPCR基因检测的方法验证内容，需首先确认是使用有证试剂盒（如CE approved），还是LDT（Laboratory Developed Test, 实验室自主研发试剂盒）或修改有证试剂盒的方法：

对于有证试剂盒：主要参考试剂盒说明书的参数说明，至少包括精密度、准确度和可报告范围（荧光定量PCR，例如HBV DNA需要做AMR，即Analytical Measurement Range 检测范围）。注：对于定性检测，国内临检中心一般会要求加做LOD （Limit of Detection分析灵敏度）。

对于LDT或修改有证试剂盒的方法验证需包括：精密度、准确度、可报告范围、分析灵敏度（LOD）、分析特异性（干扰因素和交叉反应）、以及其它可能影响检测性能的参数，例如稳定性、参考范围、携带污染等。

在检验程序常规应用前和检测流程更改时的重大更新（例如更改了检测设备、PCR方法学、PCR试剂等影响检测原理的重大更新）需要进行全验证；对于检测流程更改的非重大更新（例如更换了相同原理的抽提试剂等）和发生任何严重影响检测系统分析性能的情况发生后（如仪器主要部件故障，仪器搬迁，设施环境严重失控等），需对受影响的性能进行部分性能验证。实验室主任或者技术主管需要对更新以及所采取的措施进行评价，形成相应的书面指导意见。

参考文件：

CNAS-GL039: 2019《分子诊断检验程序性能验证指南》

WST 505—2017《定性测定性能评价指南》

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